„În acest studiu, am dezvoltat un dispozitiv microfluidic cu nanofir capabil să captureze selectiv EV-urile asociate cancerului cu o eficiență ridicată, suprimând în același timp adsorbția nespecifică printr-o simplă modificare chimică,” a declarat autorul principal Takao Yasui, PhD, profesor la școala de inginerie a Universității Nagoya. „Am demonstrat, de asemenea, că această abordare menține intacte atât proteinele membranelor EV, cât și microRNA-urile interne, arătând un potențial puternic pentru analiza sensibilă a stărilor de cancer.”
EV-urile sunt o clasă emergentă de analiți deoarece transportă o încărcătură moleculară precum ARN mesager, microRNA-uri și proteine de membrană care reflectă celulele din care provin. Până în prezent, însă, au existat provocări în găsirea modalităților de izolare a EV-urilor din fluide biologice complexe.
Potrivit cercetătorilor, tehnici de izolare a EV-urilor precum ultracentrifugarea, cromatografia pe exclusionare de dimensiune și precipitarea pe bază de polimer pot fi consumatoare de timp, necesită volume mari de probe și oferă o specificitate limitată. Aceste metode nu disting în mod fiabil între subtipurile de EV-uri.
Anterior, investigatorii din laboratorul lui Yasui dezvoltaseră dispozitive cu nanofir de oxid de zinc capabile să îmbogățească eficient EV-urile prin interacțiuni de sarcină și legături de hidrogen. În plus, cercetătorii au remarcat că nanofibrele de oxid de zinc acoperite cu polichetonă au îmbunătățit eficiența și puritatea izolării EV-urilor într-un sistem microfluidic proiectat pentru diagnosticul cancerului. Aceste descoperiri i-au determinat pe membrii echipei să exploreze dacă chimia polichetonă ar putea oferi o metodă mai controlată de atașare a anticorpilor la nanofibre.
Pentru a face acest lucru, echipa a dezvoltat o platformă bazată pe polichetone funcționalizate cu ester de N-hidroxisuccinimid, cunoscute sub denumirea de pKNHS. Au sintetizat șase variante pKNHS cu diferite lungimi de lanț și au constatat că pKNHS 4.2 a oferit cea mai eficientă combinație de stabilitate a nanofirului și imobilizare a anticorpului.
Tehnologia a fost evaluată inițial folosind celule de cancer la sân cultivate. Nanofibra fără anticorpi a capturat aproximativ 65% din EV-urile pozitive pentru CD9, în timp ce nanofibrele conjugate cu anticorpi CD9 au capturat eficient aproximativ 90%.
În continuare, platforma a fost testată folosind anticorpi îndreptați împotriva markerilor asociați cancerului ovarian CLDN3, FOLR1 și TROP2. Aceste nanofibre modificate au recuperat selectiv EV-urile din celulele de cancer ovarian și au fost ulterior utilizate pentru izolarea EV-urilor din mostre de ser sanguin obținute fr
Sursa articol https://insideprecisionmedicine.com
Senior Editor RevistaSanatatii.ro. Pasionat de lifespan, fan David Sinclair.
